如何操作荧光定量PCR仪？

　　荧光定量PCR仪的操作流程主要包括实验前准备、反应体系设计、PCR反应条件设置、仪器开机与样品放置、软件操作与程序编辑等步骤。以下是对这些步骤的具体介绍：

　　

　　一、实验前准备

　　

　　1、试剂准备：确保所有试剂和设备的质量良好，避免对实验结果产生影响。准备好所需的试剂和设备，包括PCR试剂盒、引物、模板DNA或RNA样品、PCR仪等。

　　

　　2、实验室环境：在超净工作台上进行所有步骤，使用75％乙醇或其他去污剂擦拭工作台，避免表面污染。进入实验室后需要佩戴一次性无菌口罩、无菌乳胶手套，尽量避免与同事交谈，防止PCR模板污染。

　　

　　二、反应体系设计

　　

　　设计反应体系：根据实验需要设计好PCR反应体系，包括引物浓度、模板DNA或RNA浓度、试剂盒成分等。合理的反应体系设计是保证实验成功的关键。

　　

　　三、PCR反应条件设置

　　

　　设定反应条件：根据所用的PCR试剂盒和目标分子的特性，设置好PCR反应的温度、时间和循环次数等条件。合理的PCR反应条件能够提高PCR反应的特异性和效率，减少非特异性产物的形成。

　　

　　四、仪器开机与样品放置

　　

　　1、开启仪器：开启荧光定量PCR仪及其相连的电脑。点击PCR仪上的“Eject”按钮，放入已离心过的八连管样品，再缓慢关闭接样台。

　　

　　2、放置样品：将PCR反应体系加入到0.2ml低缘八联管，盖上管盖；或加入低缘96孔板，用光学级封膜封好。注意，必须带一次性塑料手套，不要让手指接触到反应管表面。将反应管按顺序放入仪器的加热孔中。

　　

　　五、软件操作与程序编辑

　　

　　1、打开软件：在电脑上打开与PCR仪配套的软件，找到对应的实验程序文件夹。根据实验需求，选择或编辑相应的程序。编辑过程中，确保所放样品的地址以及信息准确无误。

　　

　　2、保存程序：编辑完成后，点击“File”选择“Saveas”，将程序保存到相对应的文件夹中，并务必修改程序名称（包含日期、时间等信息）。随后，通过软件将编辑好的程序传出到PCR仪上。

　　

　　总的来说，荧光定量PCR仪的操作虽然涉及多个步骤，但只要按照规范的流程进行，就可以有效地完成实验并获得可靠的结果。