ABI 7500荧光定量PCR仪技术中Ct值的自定义指什么？

　　ABI 7500荧光定量PCR仪技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

　　

　　1.Ct值的定义

　　

　　在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念--Ct值。C代表Cycle，t代表threshold（阈值，临界值），Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。

　　

　　2.荧光阈值的设定

　　

　　PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光阈值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：threshold=10′SDcycle3-15

　　

　　3.Ct值与起始模板的关系

　　

　　研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
 

 

　　

　　ABI 7500荧光定量PCR仪是特异性靶基因检测与定量的一体化平台。7500将PCR热循环，荧光检测和各种应用分析软件结合在一起，可以动态观察PCR每一循环各反应管中PCR扩增产物逐渐增加的情况。

　　

　　定量PCR系统的标准模式采用25-100微升反应体积，可以采用96孔板或单管/8联管进行实验反应。另外7500还可以升级为快速热循环样品基座，该升级为选购件，由AB公司工程师负责安装。快速热循环样品基座采用新型96孔反应板，这种反应板的管内液体上方的空间较小，可以支持5-30微升反应体积的实验。采用样品基座升级后的7500，新型96孔反应板和新型快速热循环定量PCR预混试剂，实时定量PCR实验可以在40分钟内完成，实验效果与标准2小时模式一致。

　　

　　ABI 7500荧光定量PCR仪应用广泛，包括基于相对定量分析的基因表达分析，以标准曲线为基础的病原体定量分析，定性的PCR扩增后核酸序列的SNP基因型分析，以及以阳性内对照为基础的阳性/阴性结果判定。