pcr仪的使用主要看什么参数

pcr仪的循环参数:

1、预变性--模板DNA*变性与PCR酶的*激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。

2、循环中的变性步骤--循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列*变性，可能的情况下可缩短该步骤时间，变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不*，易造成扩增失败。

3、引物退火--退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。　　退火温度对PCR的特异性有较大影响。

4、引物延伸--引物延伸一般在72℃进行（Taq酶zui适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略　　延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。

5、循环数--大多数PCR含25-40循环，过多易产生非特异扩增。

6、zui后延伸--在zui后一个循环后，反应在72℃维持5-15分钟．使引物延伸*，并使单链产物退火成双链。